雙抗和胰酶的使用方法

雙抗

一、什么是雙抗？

青霉素加上鏈霉素，俗稱“雙抗"。

二、培養液中需要加入雙抗嗎？

加不加雙抗不是絕對的，視實際情況而定。

如果你實驗室條件足夠好，如果你操作足夠規范，就盡量不要加雙抗了。

相反，如果你實驗條件不夠，操作也沒有絕對把握，還是加的好。

好的方法是做個實驗對照，看有沒有必要加雙抗。

三、如何加雙抗？

加在DMEM里，因為如果是直接在換液傳代滴加的話，那個雙抗的濃度實在不好控制，如果加多了話對細胞毒性太大，如果擔心時效，可以Z在培養液配好后分裝于100ml的小玻璃瓶中，在每啟用一瓶之前加，加了之后應盡快用完。

胰酶

一、胰酶使用的時候要注意什么？

1、在使用胰酶細胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細菌污染。

2、胰酶細胞消化液消化細胞時間不宜過長，否則細胞鋪板后生長狀況會較差。

二、以貼壁細胞的消化為例：

1、吸去培養液，用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養液洗滌細胞一次，以去除殘余的血清；

2、加入少量胰酶細胞消化液，略蓋過細胞即可，根據胰酶效率差異可以增加惑減少胰酶用量。室溫放置30秒至2分鐘（不同的細胞消化時間有所不同）

3、顯微鏡下觀察，細胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變化呈白茫狀；或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來。

4、此時吸除胰酶細胞消化液。加入含血清的*細胞培養液，吹打下細胞，即可直接用于后續實驗如果發現消化不足，則加入胰酶細胞消化液重新消化。

如果發現細胞消化時間過長，未及吹打細胞，細胞已經有部分直接從培養器皿底部脫落，直接用胰酶細胞培養液把細胞全部吹打下來。1000-2000g離心1分鐘，沉淀細胞，盡量去除胰酶細胞消化液后，加入含血清的*培養液重新懸浮細胞，即可用于后續實驗。

常用的細胞消化液為胰蛋白酶（Trypsin），EDTA等，其功能主要是使細胞間的蛋白質（如細胞外基質）水解，改變細胞間的連接，使組織或細胞片分散成單個細胞，制成細胞懸液用于進一步的實驗。

影響消化速度的因素較多，主要有胰酶溶液的活性（配制條件、凍存或4℃保存時間長短、是否反復凍融、化凍后存放時間及溫度等）、消化時的溫度（氣溫、細胞培養瓶及胰酶溶液的溫度）以及所加胰酶溶液的多少等 。

加入胰蛋白酶-EDTA溶液，視細胞瓶的大小加入體積為2ml或更多（依培養器皿的大小而定），以使充分浸潤；

一般消化時間約為1至3分鐘，肉眼觀察瓶底由半透明（細胞單層連接成片）轉為透明、點狀（出現細小空隙）時，棄去細胞消化液，或看見培養瓶壁呈白茫狀即可。并加入適量的*培養液終止消化，吹打分散；如見大量細胞片狀脫落，已消化過頭，則不能頃倒消化液而直接進行下一步操作。（消化過頭，可造成大量細胞從瓶壁上脫下，甚至造成細胞破碎。由于血清含有非特異性胰蛋白酶抑制劑，所以加入*培養基可以終止反應。